NMN & 干眼症(DED)

烟酰胺单核苷酸通过减轻高渗诱导的角膜上皮细胞中IL-17a分泌抑制巨噬细胞活化 背景:高渗应激(HS)是干眼症(DED)发病的重要病理因素。烟酰胺单核苷酸(NMN)对角膜损伤有保护作用,但其在HS诱导的DED中的作用尚不清楚。 方法: 通过高渗NaCl溶液(500mosm)构建HS体外模型,并进而用于角膜上皮细胞(CEC)和巨噬细胞系RAW264.7的共培养体系研究。分析NMN对CEC内NAD+代谢及HS标志物TonEBP含量的影响。分别通过台盼蓝染色、流式细胞技术和乳酸脱氢酶(LDH)检测进而对细胞活力、凋亡状态和乳酸脱氢酶(LDH)释放等功能进行分析。线粒体膜电位(MMP)的测定采用JC1试剂盒。分别采用RT-PCR、ELISA和westernblot对IL-17a及分泌进行检测。在HS和NMN处理后的CEC共培养24h后,观察RAW264.7细胞吞噬能力和极化的影响。此外,我们还分析了不同组RAW264.7中的Notch通路表达情况。使用SIRT1抑制剂Ex527和抗IL-17a单克隆抗体研究SIRT1和IL-17a在CEC调控巨噬细胞功能的作用。 结果:NMN干预提高了CEC中NAD+浓度,并提高细胞活力、降低细胞凋亡率及减少LDH的释放。NMN可减轻HS诱导的MMP上调、细胞内ROS蓄积和LDH的释放。此外,在CEC-macrophage共培养体系中,结果表明NMN可促进SIRT1表达,降低HS干预后的CEC中IL-17a的表达及分娩,从而减轻巨噬细胞的吞噬能力和M1极化。进一步地,NMN处理CEC可通过Notch途径抑制随后的巨噬细胞活化。基于EX527和抗IL-17a抗体干预研究表明,SIRT1激活和IL-17a抑制是NMN功能的关键进展。 结论:NMN可以通过抑制CEC中的IL-17a形成及分泌发挥调控巨噬细胞的功能,是HS应激下的潜在角膜保护剂。CEC-巨噬细胞共培养体系表明,巨噬细胞中Notch信号通路参与了NMN保护作用的发挥。 本次研究,由深圳希吉亚生物技术有限公司提供原料。

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